Method: Bradford assay [생물학실험] Protein Concentration

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실험제목 Protein Concentra tion Method : Bradford assay

실험목적 Bradford법에 의한 단백질의 정량

서론 Orna Ernst & Tsaffrir Zor, 2010, Linearizatio of the Bradford Protein 강철전아인, 2001, 단백질 실험노트 Bradford법은 Coomassie brilliant-blue 또한 반응액이 산성이기 때문에 지질을 다량으로 포함하는 샘플에서는 침전을 일으킬 수 있다.

( 중략 ) Therefore , only a narrow range of relatively high protein concentrations , 2 – 10mg / ml BSA , is used for the calibration graph , which then better fits linear regression .

▷2-10mgml BSA가 직선 그래프로 그리기에 적당한 양이라는 의미

재료 및 기구 Bradford 법을 통한 단백질 정량 ① Strandard Protein ( Albumin ) : 2mg / ml ② 시약 : Bradford reagent , DW ( 증류수 ) ③ 사용기구 : Spectrophotometer ( 광전분광광도계 ) , micropipet , vortex mixer , 96 well plate , Ep – tube rack , 1 . 5ml Ep – tube etc .

1 . 5ml Ep – tube

cell – plate

사진출처:online-shop.eppendorf.kr

실험방법 Bradford법에 의한 단백질의 정량

①Standard curve를 그리기 위한 standard protein 농도를 계산한다.②제공된 unkown sample 10ul이 들어간 반응용액을 제조한다.③각 농도별 Albumin용 약 10ul과 190ul의 Bradfordworking buffer를 잘 섞는다.(vortex에 따라 spin-down)④96well plate로 옮긴다. ⑤Spectral MAX 기기를 사용해 595nm 흡광도를 측정한다.

실험 결과 Bradford법을 통한 단백질의 정량 [Results]

엑셀 프로그램을 이용하여 작성한다.

각 농도의 흡광도 수치를 이용하여 표준곡선 작성. ② unkown sample의 흡광도 수치를 표준곡선표 (엑셀에서 y=ax±b 형태의 함수를 얻을 수 있음)를 사용하여 단백질 농도를 계산한다. 그래프의 R^2의 값이 1에 가까울수록 이상적인 값으로 추정할 수 있다

[ Disscussion ]

처음 받은 protein의 값과 내가 표준 그래프를 얻어 계산한 결과값이 일치하는지 확인한다.일치하지 않으면 왜 일치하지 않았는지, 실험 과정 등을 바탕으로 고찰 부분을 작성한다.

※ 슈슈가 직접 실험해 작성한 보고서의 일부를 발췌 ※

– TP 슈슈 작성 – TP 슈슈 작성

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